Desenvolvimento de um método ELISA indireto para detecção de anticorpos IgG contra o coronavírus da síndrome da diarreia aguda porcina com base na proteína spike recombinante

O Coronavírus da Síndrome da Diarreia Aguda Porcina (SADS-CoV) é um coronavírus patogênico entérico suíno recém-descoberto que pode causar diarreia aquosa em leitões recém-nascidos e causar perdas econômicas significativas para a indústria suína.Atualmente, não existe um método sorológico adequado para avaliar a eficácia da infecção e vacina por SADS-CoV, portanto, há uma necessidade urgente de usar um ensaio imunoenzimático (ELISA) eficaz para compensar essa deficiência.Aqui, um plasmídeo recombinante que expressa a proteína spike (S) de SADS-CoV fundida com o domínio Fc de IgG humana foi construído para produzir baculovírus recombinante e expresso em células HEK 293F.A proteína S-Fc é purificada com resina de proteína G e retém a reatividade com anticorpos anti-Fc humano e anti-SADS-CoV.Em seguida, a proteína S-Fc foi usada para desenvolver ELISA indireto (S-iELISA) e otimizar as condições de reação de S-iELISA.Como resultado, analisando o valor de OD450nm de 40 soros negativos para SADS-CoV confirmados por ensaio de imunofluorescência (IFA) e Western blotting, o valor de corte foi determinado como 0,3711.O coeficiente de variação (CV) dos 6 soros positivos para SADS-CoV dentro e entre as corridas de S-iELISA foram todos inferiores a 10%.O teste de reatividade cruzada mostrou que S-iELISA não tem reatividade cruzada com outros soros de vírus suínos.Além disso, com base na detecção de 111 amostras de soro clínico, a taxa de coincidência geral de IFA e S-iELISA foi de 97,3%.O teste de neutralização do vírus com 7 valores diferentes de OD450nm do soro mostrou que o valor de OD450nm detectado pelo S-iELISA foi positivamente correlacionado com o teste de neutralização do vírus.Finalmente, o S-iELISA foi realizado em 300 amostras de soro de granja de porcos.Os kits comerciais de outros enterovírus suínos mostraram que as taxas positivas de IgG de SADS-CoV, TGEV, PDCoV e PEDV foram de 81,7%, 54% e 65,3%, respectivamente., 6%, respectivamente.Os resultados mostram que o S-iELISA é específico, sensível e reprodutível, e pode ser usado para detectar a infecção por SADS-CoV na suinocultura.Este artigo está protegido por direitos autorais.todos os direitos reservados.